最新精液的稀释课件PPT.ppt 44页

'精液的稀释 精液稀释的步骤1.稀释前的准备工作2.精液直观指标测定3.活力测定4.密度测定5.精液的稀释6.精液的分装7.精液的保存8.实验器材的清洗、消毒 1.稀释前的准备工作①稀释液的制备每天进入实验室的第一件事就是制作稀释液。稀释液有三个部分组成：稀释粉、二重蒸馏水、庆大霉素。稀释粉：蒸馏水：庆大霉素=50g：1L：8万IU当天制作当天用，不可放到第二天继续使用。制作好的稀释液放入37℃的恒温水浴箱里备用。 3.活力测定将精液轻轻摇动或用洁净的玻璃棒搅动，用微量移液器或玻璃棒取精液20uI，放于预温后载玻片中央，盖上盖坡片，在载物台上预温片刻，用推进器将载玻片推至物镜下，在100和400倍下进行观察。如果精子无凝集、出现大群运动波，无明显死亡精子。应为“很好”；如果精液出现大群波动，但有少量死亡精子应为“好”；如果有成群运动，但有精子凝集现象，应为“一般”；有大片凝集或死亡，但有部分精子在正常运动应为“差”。 3.活力测定注意事项：（1）显微镜的光源光圈应尽量小些，光线过强，就无法看清精子；（2）每次调节显微镜焦距时，都应先将载物台先调到与物镜最近的距离，但不能使载玻片与物镜接触，然后缓慢放低载物台，同时从目镜观察，直到观察到精子为止；观察活力时应轻轻调节微调，以观察各个层次的精子活动情况。 4.密度测定精子密度：指每毫升精液中含有的精子量，它是用来确定精液稀释倍数的重要依据。正常公猪的精子密度为2.0～3.0亿／毫升，有的高达5.0亿个精子/毫升。利用光电比色法，以精子对光通透性差为依据，用分光光度计读出一个数字，然后再根据事先准备好的标准曲线确定精子的密度。 4.密度测定 4.密度测定具体操作步骤：首先打开密度仪→放入专用玻璃管→在玻璃管中加入稀释液至刻度线→盖上盖并进行调零→取下盖子用移液枪吸取200微升精液加入到玻璃管内混匀→盖上盖子并按确认键经行测量→利用测量值从密度表中查出对应精液密度 经过品质检查合格的精液应立即进行稀释。①确定精液的稀释份数与所加入稀释液的量。一般要求每份输精剂量为80ml，含有效精子40亿。例如：采得一头公猪的精液量为200ml，通过精液质量检查确定活率为0.7，其密度为2.0亿/ml，依据公式可得：理论稀释份数=200mlⅹ2.0亿/mlⅹ0.7÷40亿/份=8.7份,实际稀释份数=可根据实际情况在理论数的基础上保守约为8份。稀释液量=80ⅹ8-200=440ml。②稀释前，稀释液的温度应和精液接近，相差不能超过1℃。根据计算好的稀释头份，用量杯量取稀释液的体积，或简单一点，按1ML精液或稀释液约等于1克，用精密电子天平直接称量，国外专业公猪站多采用此法。5.精液的稀释 5.精液的稀释③稀释时，将稀释液顺着盛放精液的量杯壁慢慢注入精液，并不断用玻璃棒搅拌，以促进混合均匀；不能将稀释液直接倒入精液，因精子需要一个适应过程。还有的做法是，先将稀释液慢慢注入精液一部分，搅拌均匀后，再将稀释后的精液倒入稀释液中，这样有利于提高精子的适应能力和稀释精液的均匀混合。④精液稀释的成败，与所用仪器的清洁卫生有很大关系。所有使用过的烧杯、玻璃棒及温度计，都要及时用蒸馏水洗涤，并进行高温消毒，是稀释后的精液能保证适期保存、利用的重要条件。 6.精液的分装①精液的分装，有瓶装和袋装两种，装精液用的瓶子和袋子均为对精子无毒害作用的塑料制品。瓶装的精液分装时简单方便，易于操作，但输精时需人为挤、压或瓶底开口，因瓶子有一定的固体形态；袋装的精液分装一般需要专门的精液分装机，用机械分装、封口，但输精时因其较软，一般不需人为挤压。瓶子一般上面均有刻度，最高一刻度为80ML，袋子一般为80ML。②分装后的精液，要逐个粘贴标签，一般一个品种一个颜色，便于区分。注意要在上面标明公猪耳号、采精处理时间、稀释后密度、经手人等，并将以上各项登记到记录本上，以备查验。 6.精液的分装 7.稀释后精液的保存①分装后的精液，不能立即放入17℃左右的恒温冰箱内，应先留在冰箱外1小时左右，让其温度下降，以免因温度下降过快而刺激精子，造成死精子等增多。②放入冰箱时，不同品种的公猪精液应分开放置，否则匆忙中容易拿错精液。不论是瓶装的或是袋装的，均应平放，并可叠放。从放入冰箱开始，每隔12小时，要摇匀一次精液，因精子放置时间一长，会大部分沉淀。对于一般猪场来说，可在早上上班，下午下班时各摇匀一次。为了便于监督，每次摇动的人都应有摇动时间和人员的记录。③保存过程中，一定要时时注意冰箱内温度计的变化，以免因意想不到的原因而造成电压不稳而导致温度升高或降低。 8.实验器材的清洗、消毒最后就是把实验器材进行清洗，消毒所有器皿应用对皮肤危害性小的、易洗涤的清洁剂清洗，并用自来水冲净，再用蒸馏水冲洗三至四遍，玻璃用品干燥温度为100－150℃；精液分装管使用后立即用蒸馏水冲洗，然后用75％的乙醇冲洗一遍，沥净水分，再放入消毒柜中100℃消毒1小时。 谢谢 放射性肺炎 放射性肺炎是肺组织接受一定剂量的电离辐射后所导致的急性炎性反应。目前对该病的基础及临床研究不多，缺乏严格的诊断标准，治疗多数为对症处理、长期大剂量皮质激素治疗等。停止放射治疗后多数病人可以缓慢恢复，也有部分病人逐步发展成放射性肺纤维化，严重者会导致病人呼吸衰竭而死亡。 疾病分类放射性肺炎的诊断缺乏严格的标准，其与其后发生的放射性肺纤维化有时难以划分出一个严格的界限，所以在有些文献中将放射性肺炎和放射性肺纤维化合称为放射性肺损伤 通常将发生于放射治疗结束后3个月内的肺损伤称为急性放射性肺炎。将放射治疗结束3个月后的肺组织的放射性损伤称为晚期放射性肺损伤，晚期损伤一般都是放射性肺纤维化，但也有急性渗出性炎症表现者。 根据放射性肺炎严重程度的不同，各个国际放疗组织将放射性肺炎分为I-IV级不等，最新的（肿瘤治疗）副作用通用术语标准（CTCAE4.0）根据放射性肺炎的严重程度将放射性肺炎分级如下： I级没有症状，仅仅需要临床观察，不许治疗干预；II级有症状，需要医疗处理，影响日常工作；III级有严重症状，日常生活不能自理，需要吸氧；IV级指危及生命的呼吸功能不全，需要紧急干预如气管切开或置管等；IV级指引起死亡的放射性肺炎。 发病原因放射性肺炎发病原因明确，都是由于肺组织接受了一定剂量的电离辐射所引起，电离辐射源包括核意外等，但通常都是由于胸部肿瘤如肺癌、食管癌、淋巴瘤、胸腺瘤以及乳腺癌等接受放射治疗时一定体积的正常肺组织受到一定剂量照射后产生。放射性肺炎的发生有一定的剂量体积效应，必须有一定体积的肺组织接受了一定剂量的照射才会发生放射性肺炎。 正常人单次全肺照射产生放射性肺炎的阈值剂量是7Gy，照射剂量8.2Gy会有5%的人产生放射性肺炎，如果剂量增加到9.3Gy，则会有50%的病人产生放射性肺损伤，增加到11Gy则会有90%的病人发生放射性肺损伤。分次照射肺组织的耐受性将会增加，在4周时间内全肺接受20次照射共26.5Gy仅仅有5%的病人会发生放射性肺损伤。部分肺组织接受照射的耐受性会更大，放射性肺损伤发生的几率不仅与接受照射的剂量有关，还与接受照射的肺组织的总体积有关。 除了与肺受照射的剂量体积因素有关外，病人的年龄、既往肺功能情况、肺组织受照射的部位、以及化疗药物的应用等也会影响到放射性肺炎的发生。接受胸部放疗的病人同时或放疗前后接受了某些化疗（如博来霉素、阿霉素、紫杉醇、吉西他滨、多西他赛等），放射性肺炎的发生会明显增加。某些新的靶向治疗药物如吉非替尼（商品名：易瑞沙）、厄洛替尼（商品名：特罗凯）等与放射治疗联合应用也会增加放射性肺炎产生的风险。 发病机制放射性肺炎发病机制尚不十分清楚，传统观点认为,放射性肺炎的发生与电离辐射对II型肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞的直接损伤关系密切。而越来越多的研究认为，放射性肺炎的发生并非完全是电离辐射所导致的直接损伤，而是与损伤后产生的炎症介质所介导的急性免疫反应密切相关。 病理生理电离辐射导致放射性肺炎的靶细胞包括II型肺泡细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞以及肺泡巨噬细胞等。II型肺泡细胞合成和分泌肺泡表面活性物质，维持肺泡表面张力，接受电离辐射后，II型肺泡细胞胞质内Lamelar小体减少或畸形，肺泡细胞脱落到肺泡内，导致肺泡张力变化，肺的顺应性降低，肺泡塌陷不张。血管内皮细胞的损伤在照射后数天内就可以观察到，毛细血管内皮细胞超微结构发生变化，细胞内空泡形成、内皮细胞脱落，并可以发生微血栓形成、毛细血管阻塞，最终导致血管通透性改变，肺泡换气功能受损。肺泡巨噬细胞及成纤维细胞在接受电离辐射损伤后也会出现相应的变化，促进和加重放射性肺炎的发生。 临床表现放射性肺炎通常发生于放射治疗后3个月内。如果照射剂量较大或同时接受了化疗等，或者遗传性放射损伤高度敏感的病人，放射性肺炎也可能发生于放射治疗开始后2-3周内。肺癌病人接受放疗后70%以上会发生轻度的放射性肺损伤，多数无症状或症状轻微，仅有约10-20%的病人会出现临床症状。 临床表现放射性肺炎的临床症状没有特异性，通常的临床表现为咳嗽、气短、发热等，咳嗽多为刺激性干咳，气短程度不一，轻者只在用力活动后出现，严重者在静息状态下也会出现明显呼吸困难。部分病人可以伴有发热，甚至发生在咳嗽气短等症状出现前，多在37℃-38.5℃之间，但也有出现39℃以上高热者。放射性肺炎的体征不明显，多无明显体征，部分病人会出现体温升高、肺部湿罗音等表现。 临床表现放射性肺炎临床症状的严重程度与肺受照射的剂量及体积相关，也和病人的个体遗传差异相关。同样的疾病，肺组织接受相同体积和剂量的照射，有些病人不会发生明显的损伤，有些病人就会发生严重的肺损伤。临床症状严重者会显著影响病人的生活，需要吸氧或气管切开处理，甚至危及生命。 诊断鉴别放射性肺炎的诊断主要为排除性诊断，主要有以下几点：1）胸部放射治疗病史（或电离辐射接触史）；2）放射治疗过程中或放射治疗后3个月内出现刺激性咳嗽、活动后气短、以及发热等症状；3）经典放射性肺炎胸片或CT检查可以发现与照射野或接受照射范围相一致的斑片状淡薄密度增高影或条索样改变，病变与正常肺组织的解剖结构不符（不按肺野或肺段分布）；也有部分病人放射性肺炎的发生部位在照射野外；4）需排除肿瘤进展、肺部感染、肺梗塞等其他原因。 辅助检查1)胸部X光检查可以发现与照射野形状相一致的弥漫性片状密度增高影，对应组织学上的急性渗出性病变及间质水肿。部分病人照射野外有时也会出现相应变化，与超敏性淋巴细胞性肺泡炎相关。2）胸部CT检查：胸部CT检查发现肺组织照射后的改变比胸片更为敏感，有研究提示肺组织接受超过20Gy以上照射后就会发生肺组织CT密度的变化，这与电离辐射的直接损伤有关。典型放射性肺炎的CT表现为与照射野或接受照射范围相一致的斑片状淡薄密度增高影或条索样改变，并且病变不按肺野或肺段分布；部分病人放射性肺炎的发生部位在照射野外，甚至弥漫分布于双肺。 3）肺功能检查：肺功能改变表现为以下几个方面，一是肺活量和肺容量的降低，小气道阻力增加，肺的顺应性降低；二是弥散功能障碍，换气功能降低。但在肺癌病人表现较为复杂，由于肺部肿瘤放疗后缩小，对肺组织及气道的压迫减轻，部分病人会表现为肺活量的增加及通气功能的改善，但是由于肺泡换气功能受损，弥散功能多表现为明显下降，且随着放疗后时间的延长而表现得更为明显，直到半年到1年后才逐渐达到稳定。 4）实验室检查：放射性肺损伤实验室检查没有特异性指标。血常规如果没有伴发肺部细菌感染白细胞并不升高，中性粒细胞分类也没有增高，严重放射性肺炎病人可以出现血氧分压下降等表现。[8-9] 鉴别诊断1）肿瘤进展：如肺门肿物的增大压迫气管，或肺内出现多发转移病灶等，均可以导致咳嗽气短等症状的加重，胸腔积液、心包积液等也会导致病人气短加重。胸部CT检查可以明确诊断。2）肺部感染：在肺癌病人，由于肿物压迫阻塞气道以及放化疗导致的病人免疫力低下，常常会合并肺感染，此时与放射性肺炎的鉴别较为困难。3）肺梗塞：多数有深静脉血栓史，发病较急，血氧下降较明显，D-二聚体会明显升高，较大的血管梗塞CT血管成像检查可以发现，多数溶栓抗凝治疗有效。4）药物性肺损伤：有应用可以导致肺损伤药物病史，如博来霉素、多西他赛、吉非替尼等，病变分布弥漫，与照射野及照射范围无关。 急救措施明确为放射性肺炎后应该立即应用糖皮质激素类药物治疗，多数病人症状可以很快缓解，但需持续用药并逐步减量，连续应用至少2-3个月。气短明显者给予吸氧，病情严重者可以考虑应用气管切开正压呼吸治疗。 疾病治疗1）吸氧、化痰、支气管扩张剂等对症支持治疗，保持呼吸道通畅，缓解呼吸困难。2）糖皮质激素类药物可以有效缓解急性渗出，减轻病变部位的炎性反应及间质水肿，有效缓解弥散功能障碍。一般每天应用甲泼尼龙40-80mg，连续应用10-14天，如病情控制满意，逐步缓慢减量，2-3个月后停用，病情严重者减量更需缓慢，部分病人甚至应用4-6个月方能完全停用激素。 3）抗生素的应用：单纯放射性肺炎一般不主张应用抗生素，但由于肺组织渗出增加，气道排痰不畅，且肿瘤病人放化疗后抵抗力较弱，易于合并感染，此时应该预防性应用抗生素，但不宜长期应用，以免诱发真菌感染，使病情复杂化。如果没有明确感染征象，一般应用二代头孢类抗生素抗生素即可，当应用糖皮质激素已经控制了局部炎症渗出后即可停用，通常应用5-7天即可。4）抗氧化剂的应用：尽管尚没有明确的证据，根据动物实验等结果，应用抗氧化剂能够减少放射性肺损伤的发生，减轻肺损伤程度。可以考虑应用乙酰半胱氨酸或氨溴索等含巯基的祛痰药物，利于氧自由基的清除，减轻放射性肺损伤程度，促进恢复。5）病情严重者可以考虑气管切开正压呼吸。 疾病预后放射性肺炎的预后与肺受照射的体积及剂量有关，如果肺组织接受了大体积高剂量的照射，会产生严重放射性肺炎，甚至导致病人死亡。通常肺癌、食管癌等胸部肿瘤放射治疗如果能够控制肺组织接受照射的剂量及体积在一个合理的范围内，放射性肺炎多数是可逆的，因严重放射性肺炎致死的概率仅仅在1-3%左右。 疾病预防预防方法：由于没有特效的治疗方法，放射性肺炎的预防相对于治疗而言更为重要。首先病人接受放射治疗前要根据病人的年龄、肺功能情况、病灶部位及范围、既往病史等正确评价病人对放射性肺损伤的耐受情况，制定合理的治疗计划。对于高龄、肺功能差、病变位于下肺且范围广泛者，尽量不要同化疗同步应用，对肺受照射的剂量体积应该更为严格地控制。其次，治疗过程中注意预防肺部感染，以免相互影响加重放射性肺炎的发生。第三，对放射性肺损伤高危病人可以考虑应用阿米福汀，有动物实验及临床研究证明其能够减轻放射性损伤，但其对放射性肺炎的防护作用还不明确。 饮食注意胸部肿瘤接受放射治疗过程中病人应该进食高维生素、高蛋白、低脂肪饮食，多进食水果、绿叶蔬菜等，满足维生素的摄取，有助于放射损伤的防护。 并发症发生放射性肺炎后由于肺组织渗出增加、间质水肿且呼吸道通畅程度受损，易于发生进一步的肺感染，进一步使病情复杂化。应该注意预防，及时处理。'