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'紫外——可见分光光度法-教学课件PPT §11.1概述利用被测物质的分子对紫外-可见光具有选择性吸收的特性而建立的分析方法。一、紫外－可见吸光光度法的特点（1）具有较高的灵敏度。（2）有一定的准确度，该方法相对误差为2%-5%，可满足对微量组分测定的要求。（3）操作简便、快速、选择性好、仪器设备简单。（4）应用广泛 单色光：只具有一种波长的光。混合光：由两种以上波长组成的光，如白光。二、物质对光的选择性吸收白光青蓝青绿黄橙红紫蓝1、光的互补性与物质的颜色 300400500600350525545Cr2O72-MnO4-1.00.80.60.40.2AbsorbanceCr2O72-、MnO4-的吸收光谱350光谱定性分析基础：吸收曲线的形状和最大吸收波长 §11.2光的吸收定律—朗伯－比尔定律I0：入射光强度I：透过光强度c：溶液的浓度b：液层宽度T－透光率（透射比）A－吸光度 κ与入射光波长、溶液的性质及温度有关。当这些条件一定时，κ代表单位浓度的有色溶液放在单位宽度的比色皿中的吸光度。c的单位为g·L-1，b的单位为cm时，κ以a表示，称为吸光系数，其单位为L·g-1·cm-1，A=abc。c的单位为mol·L-1，b的单位为cm，κ用ε表示。称为摩尔吸光系数，其单位为L·mol-1·cm-1，A=εbc。 摩尔吸光系数ε的讨论（1）吸收物质在一定波长和溶剂条件下的特征常数（2）不随浓度c和液层厚度b的改变而改变。在温度和波长等条件一定时，ε仅与吸收物质本身的性质有关，与待测物浓度无关；（3）同一吸光物质在不同波长下的ε值是不同的。在最大吸收波长λmax处的摩尔吸光系数，常以εmax表示εmax表明了该吸收物质最大限度的吸光能力。 例1浓度为25.0μg/50mL的Cu2+溶液，用双环已酮草酰二腙分光光度法测定，于波长600nm处，用2.0cm比色皿测得T=50.1%，求吸光系数a和摩尔吸光系数ε。已知M(Cu)=64.0。解已知T=0.501，则A=－lgT=0.300，b=2.0cm,则根据朗伯—比尔定律A=abc，而ε=Ma=64.0g·mol-1×3.00×102L·g-1·cm-1=1.92×104(L·mol-1·cm-1) 解:由A=-lgT=abc可得T=10-abc当b1=1cm时，T1=10-ac=T当b2=2cm时，T2=10-2ac=T2例2某有色溶液，当用1cm比色皿时，其透光度为T，若改用2cm比色皿，则透光度应为多少？ 定量分析时，通常液层厚度是相同的，按照比尔定律，浓度与吸光度之间的关系应该是一条通过直角坐标原点的直线。但在实际工作中，往往会偏离线性而发生弯曲。§11.3偏离朗伯一比尔定律的原因01234mg/mLA。。。。*0.80.60.40.20工作曲线 一、物理因素(1)比尔定律的局限性比耳定律假设了吸收粒子之间是无相互作用的，因此仅在稀溶液（c<10-2mol/L)的情况下才适用。(2)非单色光引起的偏离朗伯一比尔定律只对一定波长的单色光才能成立，但在实际工作中，入射光是具有一定波长范围的。 二、化学因素溶质的离解、缔合、互变异构及化学变化也会引起偏离。例：测定时，在大部分波长处，Cr2O72-的k值与CrO42-的k值是很不相同的。A与c不成线性关系。例：显色剂KSCN与Fe3+形成红色配合物Fe(SCN)3，存在下列平衡：Fe(SCN)3Fe3++3SCN－溶液稀释时一倍时，上述平衡向右，离解度增大。所以Fe(SCN)3的浓度不止降低一半，故吸光度降低一半以上，导致偏离朗伯—比尔定律。 §11.4紫外—可见分光光度计光源单色器吸收池检测器和信号显示系统 作用：提供能量，激发被测物质分子，使之产生电子谱带要求：发射足够强的连续光谱，有良好的稳定性及足够的适用寿命类型：可见与近红外区：钨灯400~1100nm紫外区：氢灯或氘灯180~400nm一、光源 作用：从连续光源中分离出所需要的足够窄波段的光束常用的元件：棱镜、光栅二、单色器 功能：用于盛放试样，完成样品中待测试样对光的吸收常用的吸收池：石英（紫外区）玻璃（可见区）吸收池光程：1cm、2cm、3cm等注意：为减少光的损失，吸收池的光学面必须完全垂直于光束方向。吸收池要挑选配对，因为吸收池材料的本身吸光特征以及吸收池的光程长度的精度等对分析结果都有影响。三、吸收池 作用：接受、记录信号组成：检测器、放大器和读数和记录系统常用检测器：光电管和光电倍增管蓝敏（锑铯）光电管210~625nm红敏（氧化铯）光电管625~1000nm四、检测系统 单光束分光光度计双光束分光光度计双波长分光光度计（相互重叠多组分分析）五、仪器类型 单光束分光光度计优点：结构简单，价格便宜缺点：受光源影响波动大可见:721360~800nm，电表读数722330~800nm，数字显示7230330~900nm，带微处理器，配打印机紫外、可见：752200~800nm754200~800nm，带微处理器，配打印机UV758190~900nm，扫描功能紫外、可见及近红外751G200~1000nmUV755B200~100nm，带微处理器，配打印机 显色剂§11.5显色反应及其影响因素显色反应：将被测组分转变成有色化合物的化学反应。显色剂：能与被测组分反应使之生成有色化合物的试剂。 选择性好所用的显色剂仅与被测组分显色而与其它共存组分不显色，或其它组分干扰少。灵敏度足够高有色化合物有大的摩尔吸光系数，一般应有104~105数量级。有色配合物的组成要恒定显色剂与被测物质的反应要定量进行。生成的有色配合物稳定性好色差大有色配合物与显色剂之间的颜色差别要大，这样试剂空白小，显色时颜色变化才明显。一、对显色反应的要求 二、影响显色反应的因素1、显色剂的用量M+RMR 2、溶液的酸度（2）对显色剂的平衡浓度和颜色的影响（3）对有色化合物组成的影响不同的显色反应的适宜pH是通过实验确定的。（1）对被测组分存在状态的影响 pH与吸光度的关系曲线 3、显色温度：要求标准溶液和被测溶液在测定过程中温度一致。4、显色时间：通过实验确定合适的显色时间，并在一定的时间范围内进行比色测定。5、溶剂：有机溶剂降低有色化合物的解离度，提高显色反应的灵敏度。6、共存离子的影响 §11.6测量的误差和测量条件的选择误差来源：入射光源不稳定吸收池玻璃的厚度不均匀池壁不平行，表面有水迹，油污或划痕光电池不灵敏，光电流测量不准确误差影响：透光度读数误差一、仪器测量误差 二、测量条件的选择1、入射光波长的选择测量的入射光波长：最大吸收波长λmax。若干扰物在λmax处也有吸收，在干扰最小的条件下选择吸光度最大的波长。2、吸光度范围的选择两式相除： 不同透光率时测定浓度的相对误差ΔcB/cB(ΔT=0.01)T/%95908070605036.83020105220.610.75.64.03.32.92.72.83.24.36.513.0测定相对误差与透光率的关系在T=36.8%(A=0.434)时，浓度测定的相对误差最小。在实际测定时，常将吸光度控制在0.2~0.7(T=20%~65%)之间。 3、参比溶液的选择I0参比样品未考虑吸收池和溶剂对光子的作用原则:使试液的吸光度能真正反映待测物的浓度。利用空白试验来消除因溶剂或器皿对入射光反射和吸收带来的误差。 （1）如果仅待测物与显色剂的反应产物有吸收，可用纯溶剂（或蒸馏水）作参比溶液（2）如果显色剂或其他试剂略有吸收，应用空白溶液（包括显色剂或其它试剂不加待测试样溶液）作为参比溶液。（3）如试样中其它组分有吸收，但不与显色剂反应，则当显色剂无吸收时，可用试样溶液作为参比溶液；当显色剂略有吸收时，可在试液中加入适当掩蔽剂将待测组分掩蔽后再加显色剂，以此溶液作参比溶液。 §11.7分光光度测定的方法一、单组分的测定参比标准样品待测样品 二、多组分的测定a不重叠b重叠 例：用光程为1cm的吸收池，在两个测定波长处测定含有K2Cr2O7和KMnO4两种物质溶液的吸光度。混合物在450nm处的吸光度为0.38，在530nm处的吸光度为0.71，求混合物的组成。已知1.010-3mol/L的K2Cr2O7在450nm处吸光度为0.20，而在530nm处为0.05；1.010-4mol/L的KMnO4在450nm处无吸收，在530nm处吸光度为0.42。 KMnO4K2Cr2O7450nm530nm530nm 欧盟医疗器械指令与CE认证简介 欧盟医疗器械指令医疗器械是与用户的健康、安全密切相关的产品，它的上市审批与市场监管等在各国都有严格要求。在欧盟，CouncilDirective93/42/EECof14June1993concerningmedicaldevices（简称MDD指令）中对此做了全面规定。 欧盟医疗器械指令MDD指令，1993年7月12日公布于OfficialJournaloftheEuropeanCommunities，并在1998年、2000年、2002年、2003年和2007年被5次修订。 作为一个出口型的企业，需要1.熟知生产商对器械承担的责任及欧盟对器械的要求；2.熟知本公司器械的CE认证流程；3.了解其他相关机构的职责。 MDD指令的适用范围适用范围：在所有欧盟成员国以及部分非欧盟国家上市的部分医疗器械。 部分医疗器械，指：预定用于人体以下目的任何仪器、装置、器具或其他物品，无论它们是单独使用还是组合使用，包括为其正常使用所需的软件：-疾病的诊断、预防、监视、治疗或减轻-损伤或残障的诊断、监视、治疗、减轻或修补-解剖学和生理过程的探查、替换或变更-妊娠的控制 MDD指令的适用范围注意：并不是所有的医疗器械都适用于MDD指令。有源植入医疗器械90/385/EEC指令(AIMDD)体外诊断医疗器械98/79/EC指令（IVDD) MDD指令的适用范围有些边缘的产品可能并不被认为是医疗器械。属于76/768/EEC定义的“化妆品”属于2001/83/EC定义的“药品”属于89/686/EEC定义的“个人防护用品” 什么样的产品可以在欧盟上市？MDD指令规定：按照MDD指令附录II至附录VIII中规定的适当程序，证明某器械满足了MDD指令附录中适用条款，则该器械可以带上CE标志。带有CE标志的器械可以在欧盟范围内自由流通。但是，如果欧盟成员国认为该器械导致了医疗事故或存在安全问题，即使其带有了CE标志，政府仍然有权禁止其上市。 什么样的产品可以在欧盟上市？MDD指令附录I：基本要求（EssentialRequirements)包括6项通用要求、8项专用要求。所有产品必须满足。1.器械应是安全的，风险与益处相比应在可接受范围内。2.器械应根据最新的知识设计，风险应被消除或预防，至少给予警告。 什么样的产品可以在欧盟上市?3.器械应达到制造商规定的性能。4.器械的安全和性能必须在器械的使用寿命内得到保证。5.器械的安全和性能在合理的运输、储存条件不受影响。6.副作用和器械提供的益处相比应在可接受的范围内。 上市过程中各方承担什么责任？中国：企业完成注册申请资料、药监局负责质量体系考核、产品注册材料审核、产品上市后的监督。 上市过程中各方承担什么责任？欧盟：主管当局（政府）负责法规制定、产品分类、市场监督公告机构负责产品审批（CE认证）、体系认证与持续监督。企业负责起草CE技术文件、建立质量管理体系、收集市场反馈信息和事故信息并进行调查、接受持续监督。欧盟代表负责代表企业与欧盟主管当局联系、接受客户投诉、协助事故处理。 我的产品应该选择什么附录？选择附录的依据是器械的分类和企业实际情况。根据MDD指令附录IX，器械应根据预期用途、接触人体时间与部位等分成I、IIa、IIb和III类。 我的产品应该选择什么附录？接触时间：暂时＜60分钟，60分钟＜短期＜30天，长期＞30天能量来源：无源（人力或重力）、有源（其他能源，如电能）中枢神经：脑、脑膜和脊髓 我的产品应该选择什么附录？非侵入式器械所有非侵入式器械均属I类，除非组织、体液的通路或存储容器IIa类改变体液成分IIa类与真皮层接触的敷料IIb类 我的产品应该选择什么附录？侵入式器械侵入人体自然孔径的医疗器械暂时使用（如检查手套）I类短期使用（如隐形眼镜）IIa类长期使用（如尿道支架）IIb类长期使用（口腔、耳道、鼻腔中）IIa类 我的产品应该选择什么附录？侵入式器械暂时使用和短期使用的外科侵入器为IIa类长期使用的外科侵入式器械和植入式器械为IIb类直接接触中枢神经或主血管系统III类安装于牙齿上的植入物IIa类 我的产品应该选择什么附录？有源设备补充规则有能量交换的治疗器械IIa类有源诊断器械IIa类直接监控心脏、呼吸的IIb类发射电高辐射的IIb类向人体抽取或输入物质的IIa类 我的产品应该选择什么附录？特殊分类避孕器械IIb类避孕器械（植入式）III类隐形眼镜护理液IIb类记录X-ray的器械IIa类含药物成分的器械III类含动物源性成分的器械III类血袋IIb类 我的产品应该选择什么附录？灭菌的或带有测量功能的I类器械：附录VII+附录V其他I类器械：附录VII 我的产品应该选择什么附录？IIa类器械：1.如果该产品是自行开发的,有ISO13485质量管理体系的—附录II2.如果该产品不是自行开发的,有ISO13485质量管理体系的—附录VII+附录V3.如果是贸易公司,有ISO13485质量管理体系的—附录VII+附录VI4.如果还没有建立质量体系—附录VII+附录IV 我的产品应该选择什么附录？IIb类器械：1.如果该产品是自行开发的,有ISO13485质量管理体系的—附录II2.如果该产品不是自行开发的,有ISO13485质量管理体系的—附录III+附录V3.如果是贸易公司,有ISO13485质量管理体系的—附录VII+附录VI4.如果还没有建立质量体系—附录III+附录IV 我的产品应该选择什么附录？III类器械：1.如果该产品是自行开发的,有ISO13485质量管理体系的—附录II2.如果该产品不是自行开发的,有ISO13485质量管理体系的—附录III+附录V3.如果还没有建立质量体系—附录III+附录IV 各附录要求我做什么?附录VIIEC符合性声明该附录要求生产商建立CE技术文件来证明产品符合MDD指令的各项要求。同时应建立收集产品上市后信息和事故的制度。 各附录要求我做什么?附录VEC符合性声明（生产质量保证）企业应建立一个包含生产过程控制的质量管理体系，建立CE技术文件，并接受公告机构的评估。 各附录要求我做什么?附录IIEC符合性声明（全面质量保证）企业应建立一个包含设计、生产与检验过程控制的质量管理体系，建立CE技术文件，并接受公告机构的评估。 各附录要求我做什么?附录III型式试验附录IVEC确认附录VIEC符合性声明（产品质量保证）附录VIII特殊用途器械的声明上述四种附录对于目前的中国企业很少涉及到。 CE技术文件怎么写？CE技术文件的用途类似与国内向药监局递交的产品注册资料。PartA（欧盟成员国语言，如英文）符合性声明（包含生产商、生产场地、欧盟代表与公告机构的名称、地址，器械符合的法规及标准清单、产品名称与型号等）产品的商标名、品名、型号、分类及分类规则、认证途径产品的简要说明风险管理报告简述 CE技术文件怎么写？基本要求检查表各类检测及试验方法、结果的介绍产品标签、使用说明书PartB（允许使用当地语言）生产流程图各类检测报告临床研究报告关于警戒系统的说明风险管理报告 我的产品应该符合哪些标准？MDD指令中大多是原则性的规定，并没有包括具体技术要求或数据。产品必须符合欧盟相关协调标准，因为符合协调标准意味着该产品符合欧盟所有成员国的对应国家标准。 我的产品应该符合哪些标准？在没有相关欧盟协调标准的情况下，优先选择ISO标准，其次欧盟成员国国家标准，再次美、日、澳等发达国家标准。上述标准均不存在时，也可以采用中国标准或企业标准。 我的产品应该符合哪些标准？欧盟协调标准指的是欧洲标准委员会或欧洲电工标准委员会受欧盟委员会委托而制订的标准。欧盟所有成员国必须把协调标准转化为各自国家标准。 我的产品应该符合哪些标准？主要协调标准有：有源器械EN60601系列生物兼容性ENISO10993系列辐照灭菌ENISO11137系列无菌包装ENISO11607系列 我该选择哪个机构做认证？获得欧盟委员会批准，有资格进行CE认证的机构称为公告机构（NotifiedBody) 我该选择谁做欧盟代表？MDD指令规定，欧盟境外的企业必须在欧盟境内指定一名欧盟代表，负责与主管当局联系、接受客户投诉、协助事故报告与调查等。建议选择熟悉欧盟法律法规的、能长期合作的、稳定的机构做欧盟代表。器械的包装和说明书上必须包括欧盟代表的名称与地址。 我是贸易公司，也是这样要求吗？如果是一个贸易公司，准备申请CE认证，需要建立CE技术文件partA，同时必须与供应商签定质量协议。1.如果供应商的产品已通过CE认证,OK.2.如果供应商通过ISO13485认证,审核ISO13485认证审核报告.3.除上述二种情况外,至供应商现场审核. 我生产无菌器械，谁来帮我灭菌？如果自行灭菌，则灭菌过程必须符合相关欧洲协调标准的要求。如果委托其他公司或灭菌站灭菌，则该灭菌机构有EN550/EN552/EN554/ENISO11137证书和ISO13485证书，否则必须去灭菌机构现场审核。 通过CE认证后根据MDD指令的规定，CE证书的有效期为5年。在有效期内，公告机构将每年对企业进行现场检查，在必要时进行额外检查。5年有效期满后，可以申请证书有效期再延长5年。 通过CE认证后在欧盟代表办理完相关注册手续后，您的产品就可以在全欧盟境内自由流通了。欧盟要求在产品包装、说明书、（可能的情况下）产品本身上使用CE标志。 通过CE认证后同时，必须：1.收集与产品的安全和有效相关的市场反馈信息，不断完善产品；2.收集相关标准和法规更新信息，确保产品持续符合相关要求；3.对与产品相关的医疗事故，应认真履行事故报告和调查的义务；4.不断更新CE技术文件。 通过CE认证后如果一起事故或准事故与产品相关，则应向主管当局报告。事故：导致健康严重受损严重威胁生命的疾病或损伤身体功能的永久损伤或身体组织的永久损坏2-10天之内报告！ 通过CE认证后准事故：会导致死亡或健康严重受损，但没有发生。30天之内报告！ 通过CE认证后通过CE认证的器械。如果欧盟成员国认为：产品不符合基本要求产品采用标准不当标准存在缺陷有权将器械撤出该国市场，并通知欧盟委员会。这是制造商可能碰到的最为严重的事件！ 参考资料MEDICALDEVICES:Guidancedocument欧盟委员会制订的指南，具有最高的权威性。目前包括28个文件，主要有警戒系统指南(MEDDEV2.12/1)、临床资料评估指南(MEDDEV2.7.1)、含乳胶器械的评价(MEDDEV2.5/9)等。 谢谢!'